ELISA试剂盒实验没有检测到阳性信号的原因?
可能原因有
①一抗和二抗不匹配
②没有足够的一抗和二抗来结合目标蛋白
③封闭剂与一抗或二抗有交叉反应
④一抗不识别待检物种蛋白
⑤抗原量不足
⑥组织中目的蛋白含量低
⑦转膜不充分
⑧洗膜过度
⑨过度封闭使目标蛋白不能显色
⑩一抗失效
 

相应的处理办法分别是
①保证二抗与一抗宿主物种相同(如一抗来自小鼠，二抗须为抗小鼠抗体)
②使用高浓度抗体，4℃延长孵育时间(如过夜)
③使用温和的去污剂如吐温-20或更换封闭剂(脱脂奶粉、BSA、明胶等)
④参照况明书，比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应，设置阳性对照
⑤保证每条泳道蛋白上样量不低于20-30μg，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照
⑥ 浓缩样本使信号zui大化
⑦使用可逆染色剂如立春红S检测转膜结果，检查转膜操作是否正确
⑧适度洗膜
⑨预实验选择合适的封闭剂或缩短封闭时间
⑩使用新鲜抗体，重复使用有效浓度会降低?